Envoyé par : Andy
Répondu par : Jean-Sébastien Parent
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2007-10-05 |
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TECHNIQUES D'ÉTUDE DES INTERACTIONS PROTÉINES-PROTÉINES
4- Technique des deux hybrides 4-III- Expression du gène HIS Bonjour, dans cette section, je comprend le principe et l'intérêt des hybrides. Les levures, ayant eu les 2 plasmides, possèdent les trois AA (Leu, Trp, His). Je ne comprend pas pourquoi et comment un milieu Leu-, Trp- et His- permet la selection des levures qui ont ses 3 AA ? Merci |
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Salut. Tout d’abord il est important de comprendre que les levures utilisées dans cette expérience ne peuvent produire les résidus Leu, Trp et His d’elles-mêmes. Les gènes Leu et Trp sont donc réintroduits dans la levure avec les vecteurs codants pour les protéines de fusion. La première protéine, dites «appât», est la protéine d’intérêt (celle que l’on étudie) fusionnée au domaine de liaison à l’ADN du facteur de transcription viral : Gal4. La deuxième protéine de fusion contient alors le domaine d’activation de Gal4 et le reste de la protéine est codé par la banque de cDNA, il y a donc une multitude de possibilité. C’est dans cette banque de cDNA que se trouvent les «proies» c’est-à-dire les protéines que l’on ne connaît pas et que l’on recherche. Si les deux vecteurs sont correctement introduits, les levures sont maintenant capables de produire les résidus Leu et Trp dont les gènes sont transcrits automatiquement, elles peuvent donc vivre sur un milieu Leu- et Trp-. Par contre, pour produire le résidu His, il faudra que la levure transcrive le troisième vecteur et la seule façon d’y arriver est de reconstituer le facteur Gal4. La raison pour cela est que le gène His est sous le contrôle de la séquence d’activation par Gal4. La reconstitution des deux parties du facteur de transcription sera possible si la protéine «appât» étudiée interagit avec la protéine «proie» encodée par le cDNA introduit. Si l’interaction est assez forte, le troisième acide aminé est produit et la levure est maintenant capable d’évoluer sur un milieu Leu-, Trp- et His-.
Excuses moi pour le retard, il y a eu de la confusion au début de la session. Bonne chance dans ton examen. |
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