Tutorat en ligne de l'Agora du Département de biochimie: Banque de Questions/réponses : Impression

BCM-1501-A | Section générale- Origine biochimique de la vie | Question #309

Envoyé par : abdourakhmane caba Répondu par : Billy breton  2005-11-06
bonsoir monsieur, est ce que vous pouvez m'eclaircir un peu sur la methode de sequencage par terminaison de chaine et le terme d'amorce merci d'avance
Votre question est relativement large. Une armorce est une courte séquence d'ADN syntéthique qui vient se fixer (hybrider) sur l'ADN matrice. Par la suite l'ADN polymérase peut venir s'asseoir sur le complexe ADN matrice/amorce et faire l'élongation de la chaine d'ADN matrice. La terminaison de chaine se produit suite à l'incorporation d'un ddNTP (didéoxy nucléotide). La réaction se produit dans 4 tubes différents 1 tube ddATP, 1 tube ddCTP, 1 ddGTP et finalement un tube ddTTP. L'introduction du ddNTP est aléatoire, par conséquent toutes les possibilités de longueur de chaine est générées. Lorsque vous déposé les produits de synthèse sur un gel, on peut voir les fragments qui vont être séparé en fonction de leur taille et en observant les tailles relatives dans les différentes pistes (A,G,C ou T), reconstitué la séquence d'ADN

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