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BCM -
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Envoyée par : Vanessa
Répondue par : Jean-François Ouimette
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2005-11-23
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Question
#319
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Bonjour,
Pour l'électrophorèse des protéines, pourquoi doit-on dénaturer les protéines?
Quelle est l'utilité d'utiliser le B-mercaptoéthanol?
Pour le PCR, amplification élective, mise en évidence du gène HFE, quels sont les moyens utilisés pour dénaturer l'ADN pendant l'amplification?
Quel est l'équivalent de la Taq-polymérase in vivo?
Le PCR s'effectue in vitro, il tente de reproduire quelle étape concernant l'ADN in vivo?
Merci d'avance
Vanessa, étudiante en technologie d'analyses biomédicales |
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Réponse
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Pour l'électrophorèse, il est important de dénaturer les protéines pour vraiment obtenir un polypeptide linéaire et ainsi évaluer sa taille réelle. Les agents dénaturants qu'on rajoute, le SDS, le beta-mercaptoéthanol, le DTT vont permettre de détruire toutes les interactions (SDS) qu'il pourrait y avoir mais vont aussi permettre de détruire les ponts disulfures (beta-mercaptoéthanol) qui peuvent être présents dans une protéines. Ces ponts disulfures feraient en sorte que le peptide n'est pas linéaire ce qui pourrait retarder sa migration sur gel et faire en sorte qu'on surévalue sa taille réelle après migration sur un gel de type SDS-PAGE
La dénaturation de l'ADN se fait pendant l'une des étapes de la PCR, ou la température est augmentée jusqu'à 95 deg celsius, ce qui cause la séparation des deux brins.
la Taq polymérase est une ADN polymérase qui est présente chez la bactérie Thermus aquaticus et chez les mamifères, c'est donc une ADN polymérase spécifique de l'espèce qui permet de faire la réplication de l'ADN (lors de la mitose)
le PCR est polymerase chain reaction et est en fait un procédé pour amplifier de l'ADN, processus qui est complètement artificiel est qui est seulement un outil pour les scientifiques afin d'amplifier un gène qui n'est présent que 2 fois dans tout un génome diploide pour permettre l'étude de celui-ci. C'est en fait une réaction de polymérisation qui ce produit dans une cellule mais, qui dans le contextge d'une PCR n'est pas effectué 1 seule fois mais bien une vingtaine de fois à la suite (d'où chain reaction)
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