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BCM-3512
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Envoyée par : Étudiant(e) Biochimie
Répondue par : Marie-Claude Sincennes
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2005-10-26
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Question
#305
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Bonjour j'aurais 2 questions.
1- concernant le criblage au noyau, j'aimerais comprendre comment on reconstitue le transport nucléaire une fois les cellules perméabilisées.
2- concernant la translocation dans le RER comment en met en évidence de manière expérimentale le pore aqueux.
merci à l'avance. |
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Réponse
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Bonjour!
Question 1:
Premièrement, les cellules sont perméabilisées avec la digitonine, un détergent qui forme des complexes avec le cholestérol. Cela détruit la membrane plasmique, mais permet de conserver l'intégrité des membranes nucléaires. Cela permet donc d'extraire les noyaux intacts des cellules. Les protéines nucléaires nécessaires au transport nucléaire sont toujours présentes, alors que les protéines cytosoliques nécessaires au transport nucléaires sont absentes. Quand on ajoute simplement de l'ATP, il ne se produit pas de transport nucléaire, car il manque toujours les protéines cytosoliques. Quand on ajoute un lysat cellulaire, celui-ci contient des facteurs cytosoliques nécessaires au transport, alors le transport de l'antigène-T a lieu. Toutefois, si on ajoute le lysat sans ATP, il ne se produit rien, ce qui signifie que l'importation de l'antigène-T nécessite à la fois de l'ATP et des protéines cytosoliques.
Question 2:
Dans la figure, une molécule fluorescente est attachée à la chaîne polypeptidique en croissance, toujours liée au ribosome. Les ions I-, lorsqu'ils sont en contact avec cette molécule, ont la propriété d'arrêter la fluorescence (quench). Quand les ions I- sont dans le cytosol, ils peuvent arrêter la fluorescence du ribosome libre, car ils ont accès à la molécule fluorescente. Toutefois, ils ne peuvent aller rejoindre la molécule fluorescente lorsque le ribosome effectue une jonction serrée avec le pore aqueux, alors les ribosomes liés au pore aqueux sont fluorescents. Si, toutefois, on ajoute les ions I- dans la lumière du réticulum endoplasmique, alors ces ions ont accès à la molécule fluorescente par le pore aqueux et il n'y a pas de fluorescence. Un ion dans le ER peut aller rejoindre un polypeptide en croissance toujours attaché au ribosome, ce qui ne serait pas possible s'il n'existait pas de pore aqueux.
Voilà, j'espère que ça répond à tes questions. Si tu en as d'autres, n'hésite pas!
Marie-Claude
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