Envoyé par : Autre
Répondu par : Martin Audet
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2007-03-15 |
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J'aimerais savoir comment je peux determiner le Km d'un substrat experimentalement (par cinetique enzymatique, par fluorescence).
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Le truc pour avoir déterminer le Km d'un ensemble enzyme substrat de type Michaelis-Menten simple est de determiner l'activité d'un enzyme pour une période de temps donnée. Pour ce faire, on peut utiliser par exemple un subtrat qui devient fluorescent après avoir subit la catalyse d'un enzyme. On va alors mesurer la quantité de fluorescence obtenue après un très court moment pour différentes quantités de subtrat. En divisant la fluorescence par le temps d'incubation avant la lecture, on obtient alors la vitesse initiale en des termes de fluorescence / unité de temps. Avec ces données on construit la courbe de Michealis-Menten et on extrait le Km.
Martin |
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