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BCM-3514
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Envoyée par : Etudiant(e) Sciences biologiques
Répondue par : Marieke Rozendaal
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2010-04-17
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Question
#551
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Bonjour,
concernant l'article à analyser, j'ai du mal a saisir et a comprendre le tableau 1 et aussi la figure 4b et 4d
merci |
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Réponse
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Bonjour,
Pourrais-tu me dire c'est quoi exactement que tu comprends pas dans le tableau 1 et la figure 4b, pour que je puisse mieux focuser ma réponse?
Pour la figure 4d, on regarde ici un essai de luciférase pour valider deux cibles proposés pour la miR-1.
La question: les séquences qui sont proposées comme étant des cibles pour la miR-1, sont elles fonctionnelles? Deux séquences sont testées: celle dans la 3' de Hand2 et celle dans la 3' de TB4.
La méthode: par vecteur rapporteur. Le vecteur TK-luc exprime la luciférase de façon constitutive. Plusieurs copies de la séquence cible de miRNA dans le 3’ du mRNA sont clonés après le gène de la luciférase. Si la miR-1 lie la séquence on va observer une diminution de l'activité de luciférase.
Le résultat: La co-transfection de miR-1 avec Tk-Hand2 or Tk-TB4 diminue l'activité de luciférase. Cela n'est pas le cas quand pour Tk-Hand2-mut et Tk-TB4-mut, dans lesquels la séquence cible est mutée. La miR-1 mutée est capable d'inhiber le Tk-Hand2-mut.
La conclusion: Les séquences cibles pour la miR-1 sont fonctionnelles. Hand2 et TB4 sont des cibles de la miR-1.
J'espère que c'est clair!
Marieke.
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