|
BCM-3514
|
Envoyée par : Etudiant(e) Sciences biologiques
Répondue par : Marieke Rozendaal
|
2010-04-15
|
Question
#545
|
bonjour,
pouvez vous m'expliquer l'expérience faite in vitro pour démontrer que la myogénine et mef2 peuvent interagir tout en étant chacun lié a leur sequence specifique a l'ADN (procédure de l'experience et interpretation des résultats). c'est la diapo 40
merci |
|
Réponse
|
Bonjour,
Désolée pour le retard!
Dans la manip qu'on regarde ici, les protéines traduites in vitro ont été incubé avec des oligos contenant un site de liaison pour l'un des deux facteurs de transcription et couplés à soit la biotine, soit du 32P. La biotine peut interagir avec les billes agarose-avidin, ce qui permet donc de faire un pull-down des oligos biotinylés et tous les complexes qui se sont formés avec ces oligos. Sachant que le signal radioactif (32P) ne se trouve pas sur le même oligo que la biotine, on peut en déduire qu'on peut avoir un signal seulement si un complexe existe dans lequel les deux facteurs interagissent avec leurs séquences spécifiques ET en même temps interagissent ensemble (interaction protéine-protéine). C'est ça qu'on voit dans la première colonne. Les deux facteurs sont présents et on obtient un fort signal radioactif. Dans les deux dernières colonnes on voit que l'absence d'un des deux facteurs empêche la formation d'un complexe (pas de compte radioactif). Finalement on peut voir qu'un mutant de MEF2C qui peut interagir avec myogenin-E12, mais qui n'est pas capable de lier l'ADN abolit aussi la formation du complexe. La liaison à l'ADN est donc important pour la formation du complexe.
Dans la figure B, ces résultats sont confirmés dans une manip semblable mais avec les oligos conjugés de façon inverse.
J'espère que c'est plus clair comme ça, sinon n'hésites pas de poster une autre question!
Bonne chance,
Marieke.
|
| Informations |
Question consultée 5090 fois. | 4093 votes, Moyenne 3/5.0 | À vous de voter => min      max |
|
Étudiants
