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BCM-3514
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Envoyée par : Étudiant(e) Biochimie
Répondue par : Marieke Rozendaal
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2010-02-20
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Question
#536
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Bonjour,
J'aimerais juste avoir une clarification sur l'experience décrite à la diapo 137 (partie III). Alors ils ont fait une proteine de fusion qu'ils ont incubé en présence d'un extrait protéique et on remarque qu'il y a recrutement de protéines induit pas le ligand. Mon problème est que je ne comprend pas la difference entre le puit GST et le puit GST-VDRLBD. Pourquoi est ce qu'on a une interaction alors qu'il y a juste de la GST??
Aussi, pour la figure d'à côté, pourquoi est ce que la conclusion est que DRIP205 est coactivateur??
Je vous remercie!! |
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Réponse
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Bonjour,
Tu as bien compris l'idée général de l'expérience de GST-pulldown. Pour ce qu'il est la différence entre GST et GST-VDR-LBD:
*GST: il s'agit d'un contrôle négatif. Ici on va voir deux choses: 1) la GST elle-même. 2) des protéines qui interagissent avec la GST, s'il y a lieu. (Dans le cas présent il ne semble pas y en avoir, à moins qu'elles aient exactement la même taille que la GST.) Les bandes qu'on voit ici sont donc des bandes non-spécifiques.
*GST-VDR-LBD: Ici on verrait des interactions avec le LBD en absence de ligand. (Mais il n'y en a pas et donc on voit le même résultat que pour "GST": uniquement la bande representante la GST elle-même.)
Les deux sont donc des contrôles négatif essentiels si on veut identifier des coactivateurs qui sont recrutés en presence de ligand!!
Dans la figure à droite le GST-VDR-LBD a été incubé avec des produits de transcription/traduction in vitro. Il y a donc a chaque fois juste une seule protéine du complexe présente. Ceci nous permet donc de conclure que dans le complexe DRIP-TRAP-Médiateur, c'est DRIP205 qui lie directement le LBD du VDR de façon ligand-dépendante. (C'est la seule protéine pour laquelle on a une signal.)
J'espère que ça clarifie les choses!
Marieke.
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