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BCM-3514
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Envoyée par : Étudiant(e) Biochimie
Répondue par : Marieke Rozendaal
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2010-02-18
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Question
#533
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rebonjour.
j'arrive pas a bien comprendre les 2 expériences qui sont faites pour illustrer l'activation et la repression de la transcription. c'est quoi le vecteur rapporteur et vecteur d'expression et quelle est la différence entre ces 2 expériences.c'est dans la partie 3 du mader diapo 132 et 133.
merci.
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Réponse
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Bonjour,
le vecteur rapporteur est un vecteur qui code pour un gène dont on peut facilement détecter le produit, comme par exemple la luciférase (détection de lumière après l'ajout d'un substrat) ou dans ce cas-ci la chloramphenicol acetyltransferase (CAT - détection: réaction avec substrat radioactif). Dans le vecteur on peut introduire des éléments de réponse pour des facteurs de transcription qu'on veut étudier. Comme ça l'expression de notre gène rapporteur est sous la contrôle de notre facteur de transcription d'intérêt. (Ici on a un ERE -élément de réponse pour le récepteur des oestrogènes- dans un cas et un TRE -élément de réponse pour le récepteur des hormones thyroïdiennes- dans l'autre.)
Un vecteur d'expression est exactement ce que son nom veut dire: un vecteur qu'on utilise pour exprimer un gène d'intérêt. Ici donc respectivement ER, TR et RXR.
Maintenant regardons les expériences. Dans le cas d'ER, on voit qu'il n'y a pas beaucoup d'effet sur la transcription si on n'ajoute pas de ligand. (Pas d'activation mais pas de repression non plus comparé au contrôle qui est le rapporteur seul sans ER.) Par contre en ajoutant le ligand oestradiol on voit une grande activation de la transcription du gène rapporteur. La différence quand on regarde l'expérience avec TR-RXR est que maintenant on observe une repression du gène rapporteur en absence du ligand T3, et une activation quand on ajoute le ligand.
J'espère que c'est plus clair comme ça, sinon n'hésites pas de poster une autre question!
Marieke.
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