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BCM-2502
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Envoyée par : Étudiant(e) Biochimie
Répondue par : Franck Gallardo
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2007-11-27
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Question
#464
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Bonjour, j'ai deux questions.
1. À la p.20 du chapitre sur le contrôle de l'expression chez les eucaryotes dans les notes du Dr.Brisson, dans la table 29,6 au bas de la page, je voudrais savoir le rôle précis et la distinction entre séquence ''consensus'' et ''DNA bound'. Le consensus est-il ce qui est reconnu par le facteur alors que DNA bound est la séquence avec laquelle il intéragit ?
2. À la p. 8 de la même section, concernant l'expérience portant sur les sites d'hypersensibilité à la DNAse 1 (figure au bas de la page), par quels moyens expérimentaux découvre-t'on où est-ce que la DNAse a coupé précisément?
Merci. |
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Réponse
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Salut,
Pour repondre a ta première question, c'est facile puisque tu donnes la bonne reponse. Le site consensus correspond a la sequence ciblée par ton facteur de transcription. C'est cette sequence que le facteur reconnait sur le promoteur, qui dans le cas d'HSF, va etre presente dans tous les promoteurs activés par le choc thermique. Le facteur de transcription va lier la sequence consensus et va le recouvrir, ce qu on appelle DNA bound. Meme si le site consensus est de 10 nucleotides, le facteur de transcription couvrira l'ADN sur une region plus grande (DNA bound). Le cas est identique avec les enzymes de restrictions par exemple, EcoR1 reconnait le site GAATTC mais elle va lier l'ADN sur une region plus grande que le site en lui meme.
Pour ta deuxieme question, la position de ton site d'hypersensibilité est determinée par rapoort au site de l'enzyme de restriction que tu utilises. Tu realises une experience controle ou tu digère ton ADN avec l'enzyme de restriction seule et apres hybridation de ta sonde radioactive, tu detecte la presence d'une bande d'une certaine taille. Lors de l'incubation avec la DNAseI, la taille de cette bande diminuera, ou tu auras plusieurs bandes, ca depend de la sonde radioactive que tu utilises. La position du site de restriction etant connu, tu pourras determiner la position relative de ton site d'hypersensibilité.
Bonne continuation.
Franck
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