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BCM-3514
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Envoyée par : Étudiant(e) Biochimie
Répondue par : Jean-Sébastien Parent
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2007-04-19
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Question
#437
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Bonjour, pourriez-vous m'expliquer comment fonctionne et à quoi sert la sélection négative via la cassette de TK et avec le ganciclovir ? |
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Réponse
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Salut. Il est important de comprendre que la sélection négative vise à tuer les cellules qui auraient mal intégré le transgène. C’est pourquoi un gène comme la HSV-TK (thymidine kinase du virus de l’herpès) peut être placé à l’extérieur de cassette à introduire. Si la recombinaison se fait comme désirée, alors le gène HSV-TK ne sera pas intégré dans le génome. Par contre, si une recombinaison non-homologue a lieu, alors le gène HSV-TK est intégré et les cellules sont maintenant sensibles à la ganciclovir. Cette molécule est phosphorylée par la TK maintenant produite par les cellules et devient alors un inhibiteur compétitif de l’ADN polymérase et tue la cellule. Je vais essayer de joindre une image qui montre la position du gène de sélection négative dans un pareil cas. A représente le gène cible et B, le vecteur. 1 représente le produit de la recombinaison homologue où le gène de sélection négative n'est pas intégré.
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