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BCM-2502
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Envoyée par : Thierry Vincent
Répondue par : Jean-Sébastien Parent
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2006-10-19
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Question
#396
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Bonjour, oui j'ai encore quelques question!
Au sujet des notes de cours de Véronique Bourdeau il y a de petites mises en situation à la toute fin des notes de cours (diapositive 95 à 97) et j'aurais deux questions au sujets de celle-ci.
(Diapo 95) On a un clone partiel d'ADNc et on veut cloner le gène correspondant.
Une sonde sonde est généré à partir du fragment d'ADNc disponible. (ok)
La banque utilisée est une banque génomique de l'organisme désiré
Pourquoi ne pas utilisé une banque d'ADNc?
(Diapo 97) On ne dispose pas de clone d'ADN de départ; pour générer une sonde on nous propose d'utiliser un anticorps comme sonde; comment sai-t-on que l'on a le bon anticorps? Qu'est-ce qu'une banque d'expression? est-ce une banque contenant des vecteurs prêt à exprimé le gène d'ADNc contenu dans ces vecteurs?
Merci
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Réponse
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Pour la diapositive #95, si l’on veut obtenir un gène complet cela signifie que l’on désire avoir le promoteur, les introns et tout le reste. C’est donc pour cette raison que l’on crible une banque génomique plutôt qu’une banque d’ADNc qui ne contient pas toutes ces informations.
Dans le cas de la diapositive #97, on génère un anticorps à partir de la séquence d’ADNc que l’on possède et on peut tester le sérum obtenu par Western Blot ou par ELISA (Fig 5-1 du Voet). Si le sérum semble reconnaître le bon morceau de protéine, alors on peut l’utiliser pour le criblage de la banque d’expression. Comme tu l’as déjà compris, les vecteurs spéciaux des banques d’expressions permettent de produire des protéines à partir des ADNc que les bactéries contiennent.
J’espère avoir bien répondu à tes questions.
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