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BCM-2502
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Envoyée par : Thierry Vincent
Répondue par : Jean-Sébastien Parent
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2006-10-19
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Question
#395
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Bonjour, j'ai quelques questions.
Dans les notes de cours il est écrit que par chromatographie sur oligo-d T cellulose les ARNm (d'une solution d'ARNm, ARNt et d'ARNr par exemple)peuvent être isolé; comment est-ce que ca fonctionne? Pourquoi les ARNm sont spécifiquement isolé par cette méthode?
Suite à ce, comment sait-on que l'ont a / trouve-t-on l'ARNm qui nous intéresse?
Comment frabrique-t-on des sondes identiques? Faut-il isolé l'ADNc d'intérêt d'un clone puis par PCR amplifié cette ADN? ou quelque chose proche de ca?
Au sujet de ma question posée il y a quelque jour je cherchais à savoir si j'avais bien compris la différence entre une sonde identique et synthétique.
Merci! |
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Réponse
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Salut. Les ARNm sont grandement modifiés à la suite de leur transcription comme vous l’avez vu dans ce cours. Une de ces modifications est l’ajout d’une queue de poly-adénine (poly(A)) en 3’, qui est nécessaire à la stabilité (demi-vie) et à la traduction des ARNm. C’est pourquoi un oligonucléotide poly-thymine (oligo-dT) va s’hybrider avec la partie 3’ de tous les ARNm et pas des autres ARN. Tu peux trouver plus de détails sur les queues poly(A) à la page 945 du manuel Voet (section 29-4). Le/les ARNm d’intérêts peuvent être identifiés grâce à différentes techniques de criblage qui dépendront des ressources disponibles. Dans cette partie du cours, on utilise beaucoup des sondes d’ADN comme à la page 58 de la deuxième partie où l’on peut identifier la colonie de bactéries qui contient l’ADNc que nous recherchons. Cette technique représente une bonne option de criblage dans un tel cas, mais il en existe beaucoup d’autres.
Les différentes sondes d’ADN peuvent être synthétisées à partir de plusieurs matrices, qui sont toujours faites d’ADN elles-mêmes. Elles peuvent être amplifiées d’ADN génomique isolé directement d’un organisme. Elles peuvent également être amplifiées à partir d’ADNc contenus dans une banque ou même dans une réaction de Réverse-transcription (RT). Le choix dépendra, encore une fois des ressources mises à notre disposition.
Attention, le terme synthétique serait plutôt utilisé pour qualifier une sonde produite chimiquement par opposition à biochimiquement (réaction de polymérisation). Cette sonde synthétique serait donc un oligonucléotide relativement court et spécifique à une séquence.
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