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BCM-3512
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Envoyée par : Rym
Répondue par : Jean-Sébastien Parent
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2006-10-03
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Question #380
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Bonjour,
Dans la section 3 (cours de M.Boileau) le mutant dominant négatif bloque la liaison de l'adaptateur, quel est le but de cette méthode ? Je comprends le concept général mais j'aimerais des détails svp !
Ensuite, section 4(tjs meme cours) la technique des deux hybrides permet d'identifier la protéine lié au GAL4domaine d'activation. Pourquoi, la protéine à identifié est lié à cette partie plutot que l'autre(Gal4 binding domain). Si je comprends bien on veut savoir si cette protéine se lie à la protéine d'interet ?
Merci. |
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Réponse
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Salut, cette partie du cours reprend les différentes techniques disponibles pour prouver l’existence d’une interaction entre deux protéines. Dans le cas du dominant négatif, il s’agit d’une technique intéressante pour confirmer une interaction que l’on croit détecter. Il nous faut une certaine connaissance de la protéine d’intérêt dans le but de savoir quoi mesurer (dans l’exemple des notes, on mesure l’activité Ras). On exprime donc un domaine de la protéine qui pourrait être responsable de l’interaction. Dans le cas où l’hypothèse est bien fondée, on verra une diminution de l’activité puisque l’interaction (point de départ de la cascade) ne peut plus se faire de façon efficace.
Dans le cas de la technique du double-hybride, les deux domaines de Gal4 ne sont que des outils et pourraient, à toute fin pratique, être interchangés. L’essentiel de cette technique est plutôt l’interaction de la protéine étudiée avec les protéines de la banque d’ADNc. Dans les notes, la protéine d’intérêt est fusionnée au domaine de liaison de l’ADN de Gal4. L’autre domaine est fusionné au hasard avec les ADNc de la banque qui est soumise au test. Les ADNc sont introduits dans un vecteur qui a déjà la partie du gène de Gal4 codant pour le domaine d’activation acide. C’est seulement dans le cas d’une interaction positive avec la protéine étudiée que la protéine Gal4 est reconstituée et que la levure peut survivre milieu sélectif. Cette technique a déjà été discutée dans la banque agorabcm question #306.
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