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BCM-2502
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Envoyée par : Étudiant(e) Biochimie
Répondue par : Julien Desroches
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2005-12-15
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Question
#328
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Je ne comprends pas la notin de gene rapporteur? Voulez vous m'expliquer ?
Merci beaucoup. |
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Réponse
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Bonjour,
Un gène rapporteur est utilisé dans les expériences de transfection transitoire dans le but d’étudier la régulation d’un promoteur cible par des molécules telles que : un facteur de transcription, un coactivateur transcriptionnel, etc.Un gène rapporteur est un gène exogène (non exprimé dans une cellule) cloné dans un vecteur d’expression en aval d’un promoteur d’intérêt et dont les niveaux d’expression de ce gène dépendent de la régulation du promoteur. La principale caractéristique de ce gène rapporteur est que ses niveaux d’expression peuvent être facilement et rapidement quantifié dans un simple lysat cellulaire. Par exemple, la luciférase est le gène majoritairement utilisé dans ce type d’expérience.
Expérimentalement, suite à une transfection transitoire, entre 24 et 48h, on fait une lyse totale des cellules transfectées et on récolte le lysat qui contient un niveau quelconque de luciférase. Pour quantifier son expression, on incube le lysat avec de la luciférine. La luciférase en présence de luciférine émet de la lumière à une certaine longueur d’onde. On mesure ainsi par spectrophotométrie les niveaux relatifs de luciférases obtenus suite à la transfection pour les différentes conditions expérimentales.
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